1.培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有何影響？

　　由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。總體來(lái)說(shuō)，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些，偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。因此在配制培養(yǎng)用液時(shí)，可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。

　　2.何為傳代培養(yǎng)？

　　在進(jìn)行傳代時(shí)，如果是懸浮細(xì)胞，只需簡(jiǎn)單稀釋即可，若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀，再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細(xì)胞每毫升接種數(shù)量為5´104-8´105個(gè)，傳代密度太低，細(xì)胞容易死亡，表現(xiàn)出細(xì)胞在達(dá)到增長(zhǎng)前有較長(zhǎng)的滯留期。在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液會(huì)由于pH下降而呈現(xiàn)黃色，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到最大密度需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細(xì)胞，等長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶表面，即可進(jìn)行傳代，多數(shù)細(xì)胞需用胰蛋白酶處理將細(xì)胞從生長(zhǎng)物表面分離下來(lái)，以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。

　　3.細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境有何要求？

　　①無(wú)污染環(huán)境

　　培養(yǎng)環(huán)境無(wú)毒和無(wú)菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無(wú)污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

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