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配對(duì)抗體的制備與篩選

發(fā)布時(shí)間: 2022-02-17  點(diǎn)擊次數(shù): 1351次

配對(duì)抗體指的是可以同時(shí)結(jié)合在一個(gè)抗原分子上的兩個(gè)抗體。配對(duì)抗體,一般應(yīng)用于雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗(yàn)。

抗體配對(duì)的原理

通常情況下,一個(gè)抗原分子擁有多個(gè)抗原決定簇,將抗原注射入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫,針對(duì)不同的抗原決定簇會(huì)產(chǎn)生不同的抗體。產(chǎn)生的抗體具有特異性與專一性,即一個(gè)抗體分子只會(huì)特異性地結(jié)合一個(gè)抗原決定簇。兩個(gè)針對(duì)不同抗原決定簇的抗體,有可能同時(shí)結(jié)合到抗原分子上。如果兩個(gè)抗體同時(shí)結(jié)合到同一個(gè)抗原分子上,那么這兩個(gè)抗體就是配對(duì)抗體。

配對(duì)抗體的制備與篩選

需要注意的是,即使兩個(gè)抗體針對(duì)的是不同的抗原決定簇,也并不意味著這兩個(gè)抗體分子一定可以同時(shí)與抗原分子結(jié)合。當(dāng)一個(gè)抗體與抗原結(jié)合后,有可能會(huì)導(dǎo)致其他結(jié)合位點(diǎn)(抗原決定簇)構(gòu)型的改變,從而導(dǎo)致其他的抗體無法正常結(jié)合到抗原上。位阻效應(yīng)的存在,也可能使兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)距離較近的抗體無法同時(shí)結(jié)合在抗原上。因此想要得到可以同時(shí)結(jié)合在抗原分子上的配對(duì)抗體,在制備出抗體后,還需要對(duì)得到的抗體進(jìn)行篩選。這就意味著,要制備配對(duì)抗體,要完成以下兩步工作:抗體的制備;配對(duì)抗體的篩選。

抗體制備

 為了便于后續(xù)的篩選,制備的抗體應(yīng)為單克隆抗體,通常利用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行單克隆抗體的制備。 注意:如果單克隆抗體很少,很可能會(huì)找不到可以配對(duì)的抗體,因此,在免疫動(dòng)物的時(shí)候,應(yīng)多免疫幾只動(dòng)物,以獲得更多的單克隆抗體。

配對(duì)抗體的篩選

通常,配對(duì)抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法。篩選的原理為:在得到了單克隆抗體后,從中取出兩種單克隆抗體,一種作為捕獲抗體,另一種作為標(biāo)記抗體(HRP 酶標(biāo)記),將捕獲抗體包被在抗原板上,先加入抗原,孵育后洗去未結(jié)合的抗原,再加入標(biāo)記抗體 孵育后洗去未結(jié)合的標(biāo)記抗體,最后加入顯色液顯色。如果可以顯色,說明標(biāo)記抗體與抗原特異性結(jié)合,該捕獲抗體與標(biāo)記抗體為一對(duì)配對(duì)抗體。如果不能顯色,說明標(biāo)記抗體不能與抗原結(jié)合,從而被洗脫,該捕獲抗體與標(biāo)記抗體不是配對(duì)抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進(jìn)行配對(duì),則需重新選擇兩種單抗,重新進(jìn)行試驗(yàn),直至找出可以配對(duì)的抗體。

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 配對(duì)抗體的應(yīng)用

利用雙抗夾心法對(duì)目的抗原進(jìn)行定性定量的檢測(cè),必須要用到可以同時(shí)與目的抗原結(jié)合的配對(duì)抗體。對(duì)于比較常見的目的抗原,可以通過購買試劑盒的方式得到相應(yīng)配對(duì)抗體。但是市面上試劑盒的種類有限,有些目的蛋白在市面上無法買到對(duì)應(yīng)的試劑盒,為了進(jìn)行雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗(yàn),需進(jìn)行相應(yīng)的配對(duì)抗體的生產(chǎn)。


 


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